Клонирование с помощью синтетических олигонуклеотидов
В последнее время для клонирования используют олигонуклеотиды, синтезированные на основе расшифрованной аминокислотной последовательности продукта. С их помощью выявляют фрагменты с нужным геном среди тотальных рестриктов геномной ДНК ( как, например, при клонировании гена BAF1 , Halfter et al., 1989) или селективно амплифицируют ген. Так, на основе аминокислотной последовательности короткого пептида ДНК-полимеразы III млекопитающих был синтезирован праймер для полимеразной цепной реакции (ПЦР) и амплифицирован фрагмент дрожжевого гена POL30 . Этот фрагмент длиной в 120 п.н. был использован для идентификации гена POL30 в банке генов на основе центромерного вектора YCp50 ( Bauer, Burgers, 1990 ). Для клонирования гена геликазы использовали в качестве праймеров два вырожденных олигонуклеотида, синтезированных на основе последовательностей, окружающих консервативный участок в белке. С помощью амплифицированных фрагментов выявлено пять генов ( Chang et al., 1990 ).
